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克隆得到雷公藤一型4α-甲基氧化酶（TwSMO1）（GenBank KX987126）全长基因，并对其进行序列分析及初步的功能验证。方法：根据雷公藤转录组数据，利用cDNA末端快速扩增（RACE）技术克隆得到雷公藤4α-甲基氧化酶基因（TwSMO1），并利用相关软件对所得核酸序列及其所编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。用茉莉酸甲酯（MeJA）诱导雷公藤悬浮细胞，用实时荧光定量（RT-PCR）的方...
克隆高良姜1-脱氧-D-木酮糖5-磷酸还原异构酶(DXR)的全长cDNA,分析其组织表达模式及茉莉酸甲酯(MeJA)的调控模式,为高良姜有效成分的基因调控及基因工程育种奠定基础。 方法: 应用简并引物RT-PCR和RACE技术从高良姜根茎中克隆DXR全长cDNA,运用生物信息学解析其编码的蛋白质结构,实时荧光定量PCR法分析其组织表达模式和MeJA的调控模式。 结果: 克隆了高良姜DXR全长cDN...
铁皮石斛均一化全长cDNA文库的构建与序列分析
铁皮石斛 均一化 cDNA文库 序列分析
2013/3/12
为了获得药用植物铁皮石斛功能基因的信息和筛选功能基因。方法: 以SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)方式合成全长cDNA,结合DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建铁皮石斛茎组织的均一化全长cDNA文库。结果: 该文库重组率为93.9%,文库滴度1.3×106 cfu·mL-1,插入片段平均...
乌拉尔甘草HMGR基因cDNA的克隆与序列分析
甘草 HMGR RACE
2012/8/2
对乌拉尔甘草3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶( 3-hydroxy-3methylglutary CoA reductase,HMGR) 的cDNA克隆并进行序列分析。 方法 :根据NCBI数据库中的豆科其他物种HMGR的cDNA保守区设计引物,利用同源扩增和cDNA末端快速扩增技术从甘草根中获得目的基因;利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找开发阅读框,Prosite分析蛋白质...
甘草鲨烯合酶基因及cDNA的克隆与序列分析
甘草 鲨烯合酶 RT-PCR
2012/8/2
对甘草鲨烯合酶(SQS)基因的cDNA及DNA进行克隆及序列分析。 方法 :根据已报道的光果甘草 SQS1 基因的cDNA序列设计引物,采用RT-PCR的方法,提取甘草根的RNA然后反转录成cDNA,以cDNA为模板,扩增出SQS基因的cDNA序列,以甘草总DNA为模板,扩增SQS的DNA序列。 结果 :序列分析表明,克隆获得的甘草 SQS1 的cDNA编码区为1 242 bp,编码413个氨基酸...
连作地黄cDNA消减文库的构建及分析
地黄 连作障碍 抑制性消减杂交 cDNA文库
2012/7/19
通过构建连作地黄cDNA消减文库,探讨地黄连作障碍的分子机制。 方法 :利用抑制性消减杂交(SSH)技术构建连作地黄的正反消减文库,通过蓝白斑筛选、PCR的方法鉴定出阳性克隆,并对其进行测序和生物信息学分析。 结果 :连作地黄cDNA消减文库构建成功,正向和反向消减文库均筛选了300个阳性克隆。测序结果表明:正库、反库分别获得232条、214条特异的EST序列;经NCBI数据库分析,正库、反库中分...
濒危药用植物金铁锁(Psammosilene tunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu.)的有效成分三萜总皂苷有显著的药理活性。为克隆和鉴定金铁锁三萜皂苷生物合成途径中的关键酶基因——鲨烯合酶的全长cDNA，本研究采用同源兼并引物PCR和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法克隆了其全长cDNA；结合大肠杆菌异源表达、体外酶促反应及针对产物化学结构的GC和GC-MS分析等方法鉴定了其...
本文首次从丹参毛状根中克隆得到了丹参4-(5′-二磷酸胞苷)-2-C-甲基-D-赤藓醇激酶(简称为SmCMK)的编码基因的全长cDNA序列，GenBank注册号：EF534309。KEGG软件分析表明：SmCMK位于二萜类化合物生物合成的上游途径——非甲羟戊酸途径(DXP)，是DXP途径上唯一的激酶。所克隆的SmCMK基因序列全长1 493 bp，包括完整的开放阅读框(open readingfr...