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【发明专利】用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR引物探针组、方法和应用。
该成果研发了一种鸭新城疫、鸭瘟和鸭坦布苏病毒病的多重PCR检测引物，包括针对鸭新城疫病毒、鸭瘟病毒和鸭坦布苏病毒的引物。建立了多重PCR体系，可准确检测水禽NDV、DPV、DTMUV的单一或混合感染，并对该多重PCR体系进行了优化，确定了最佳的引物比例、引物浓度和Premix rTaq酶，使得NDV、DPV、DTMUV3种病毒的DNA扩增效果更好，检测精度更高，在鉴别时具有重要优势。
旨在分析禽腺病毒血清4型（FAdV-4）感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平，本研究设计鸡NLRP3特异性引物，利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体，制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化，成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法，并利用该方法对致病性F...
1种检测新城疫病毒的微滴式数字PCR方法
新城疫病毒 数字PCR 检测方法
2021/3/9
本研究旨在构建一种新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）的微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以NDV F基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了NDV ddPCR。对ddPCR反应引物和探针浓度、退火温度进行了优化，并对该方法的灵敏度、特异性和重复性进行测定。试验结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900和2...
2020年5月13日，福建省农业科学院畜牧兽医研究所牵头制定的福建省地方标准《鸭巴泰病毒RT-PCR检测方法》审定会在福州召开。会议由福建省市场监督管理局组织，邀请福建省畜牧兽医学会、福建省标准化研究院、福建省畜牧总站、福建师范大学、福州市动物疫病预防控制中心、福建农业职业技术学院和兆丰华生物科技（福州）有限公司7个单位的专家对该标准进行审定。
旨在建立特异、敏感的实时荧光定量PCR（FQ-PCR）方法，用于非洲猪瘟病毒（ASFV）和猪瘟病毒（CSFV）野毒株的快速鉴别检测。针对ASFV的P72基因和CSFV野毒株的5'UTR非编码区序列的保守区域分别设计1对特异性引物和1条探针，经优化反应条件，建立一种基于TaqMan MGB探针技术的FQ-PCR方法，验证方法的敏感性、特异性和稳定性，对50份临床样品进行检测，并与猪瘟国标方法及OIE...
区分犬瘟热病毒Asia-Ⅰ型野毒株及疫苗株的AS-PCR方法
犬瘟热病毒 检测 H基因 AS-PCR
2021/3/11
犬瘟热是一种接触性传染病，可侵害免疫系统、呼吸系统、消化系统，甚至神经系统，导致全身性的病理变化，对宠物犬、毛皮动物等存在巨大威胁。目前常用的胶体金检测法不能有效区分疫苗免疫与动物自然感染。为建立一种高效准确的鉴别犬瘟热病毒野毒株和疫苗株的检测方法，本试验对从武汉地区收集已确诊犬瘟热的6只犬分离得到的野毒株以及3株广泛使用的CDV疫苗株进行全基因组测序，从氨基酸水平和碱基水平比对分析后，确定H基因...
本试验的目的是建立更加灵敏的检测牛冠状病毒（BCoV）的RT-PCR方法，并对川西北草原牦牛病料进行BCoV病原检测。选择BCoV聚合酶基因Nsp7-Nsp9片段设计引物，通过反应条件和体系优化，建立检测BCoV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。结果显示：所建方法特异性和重复性好，灵敏性达到1×10-2 pg·μL-1；该方法对肉牛和牦牛BCoV都有良好的检测效果，优于比较的两种以BCoV ...
鸭肠炎病毒（duck enteritis virus，DEV）疫苗株自1960年以来一直被用于防控DEV感染，该疫苗安全稳定、生产技术成熟、可快速诱导机体体液免疫和细胞免疫。DEV的基因组庞大，复制非必需区多，可容纳多个外源基因的插入，被广泛用来作为基因工程载体来开发疫苗。当前，尚未见仅针对DEV疫苗株的实时荧光定量PCR检测方法相关研究报道。本研究通过分析DEV疫苗株和强毒株UL2基因特点，明确...
猪丁型冠状病毒（PDCoV）与猪流行性腹泻病毒（PEDV）均为致病性冠状病毒，可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法，根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列，设计了两对特异性引物，分别扩增其N、M基因保守区，并将其克隆至pMD19-T载体；将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板，建立了一种...
轮状病毒(rotavirus，RV)VP6基因是RV的主要分子检测靶点，但该基因的点突变会影响RV的分子检测。本试验的目的是在研究牦牛RV VP6基因遗传变异的基础上，建立检测牦牛RV的RT-PCR方法并应用于临床样本检测。采用Prime 5.0设计引物，从30个牦牛腹泻样本中扩增得到14个位于931—1 338 bp牦牛RV VP6基因片段。序列分析结果发现，与牛轮状病毒（bovine rota...
为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒（CIAV）的污染，根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针，通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的检测方法灵敏度可达10拷贝•μL－1，比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应，具有很好的特异性；批...
水貂阿留申病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用
水貂阿留申病病毒 纳米PCR 检测
2016/12/7
为建立便捷、灵敏的水貂阿留申病病毒（AMDV）纳米PCR检测方法，根据AMDV NS1基因的保守序列设计一对特异性引物，对纳米PCR反应的退火温度、胶体金浓度进行了优化；测序检测扩增基因是否发生变异；对特异性和灵敏度进行了评估。结果表明，此纳米PCR的最佳退火温度为51 ℃，普通PCR为55 ℃；加入胶体金最佳浓度在0.2~0.8 nmol•L－1，纳米PCR与普通PCR产物测序相似性...
9种鸭病毒病GeXP多重PCR检测方法的建立及其应用
鸭病毒病 GeXP检测 多重PCR 特异性嵌合引物
2016/12/26
旨在建立一种能够同时鉴别H5、H7和H9亚型禽流感病毒、基因A型鸭甲肝病毒、鸭坦布苏病毒、鸭瘟病毒、减蛋综合征病毒、新城疫病毒、鸭圆环病毒、番鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒9种常见鸭病毒病的GeXP多重PCR检测方法。根据这些病原体在GenBank上公布的保守基因序列，设计合成了12对特异性GeXP引物。用单一病毒或混合病毒样品的cDNA/DNA 模板优化反应条件，同时以其他常见鸭病病原体及鸭组织器官...
旨在对重庆地区山羊体表型淋巴结炎病原菌进行分离鉴定，并建立相应检测方法。无菌采集山羊患病部位脓液，进行病原菌分离鉴定，依据菌株16S RNA基因序列构建系统进化发育树，同时设计特异性引物，建立PCR检测方法。结果表明，从病料中主要分离到3种病原菌，分别为伪结核棒状杆菌、化脓隐秘杆菌和金黄色葡萄球菌；依据伪结核棒状杆菌磷脂酶D、化脓隐秘杆菌16S RNA和金黄色葡萄球菌nuc保守核苷酸序列设计引物，...